不同非洲豬瘟病毒實(shí)驗(yàn)室檢測方法的對比
非洲豬瘟（Africann Swine Fever, ASF）是由非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）感染引起的家豬和野豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病1。臨床癥狀與豬瘟極其相似，以高熱、皮膚發(fā)紺、內(nèi)臟器官嚴(yán)重出血、呼吸障礙和神經(jīng)癥狀為主要特征。本病傳播快、致死率高，對養(yǎng)豬業(yè)危害巨大，是我國一類動物疫病和世界動物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的必須報告的動物疫病，受到世界各國的高度重視2。本病是以節(jié)肢動物作為傳播媒介的DNA病毒。ASF已在非洲、歐洲和美洲等幾十個國家暴發(fā)，“三全水餃?zhǔn)录?rdquo;則將非洲豬瘟直接推向大眾的面前。目前，本病尚無有效的預(yù)防疫苗和治療藥物，防止疫情擴(kuò)大的有效措施就是撲殺。因此事先建立簡便、快速、準(zhǔn)確的ASFV檢測方法顯得十分必要。本文就ASFV實(shí)驗(yàn)室檢測的不同方法，進(jìn)行對比分析。
2.1.1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）
ELISA利用抗原抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測，應(yīng)用于血清抗體的檢測，適用于大批量樣品的檢測。ASFV含有約150種蛋白，目前國內(nèi)外常用作檢測抗原的蛋白有VP73、VP72、P54、P32、P30等3。
優(yōu)點(diǎn)：快速、方便。
缺點(diǎn)：（1）一般情況下, 非洲豬瘟病毒進(jìn)入豬體內(nèi)， 7天后才能誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的Ig G抗體，而7天的時候，足以出現(xiàn)早期臨床癥狀，并已經(jīng)傳染給其他家豬，因此該檢測方法往往具有難以解決的滯后性。（2）針對不同蛋白會出現(xiàn)個別差異，增加排查的難度3。
2.1.2膠體金免疫層析（GICA）試紙條
運(yùn)用雙抗體夾心法原理純化后的抗ASFV單克隆抗體制備金標(biāo)抗體, 應(yīng)用于檢測ASFV的膠體金免疫層析試紙條，也稱為檢測卡。
優(yōu)點(diǎn)：使用方便；
缺點(diǎn)：（1）靈敏度低；（2）一般情況下, 非洲豬瘟病毒進(jìn)入豬體內(nèi)， 7天后才能誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的Ig G抗體，而7天的時候，足以出現(xiàn)早期臨床癥狀，并已經(jīng)傳染給其他家豬，因此該檢測方法往往具有難以解決的滯后性3。
2.1.3熒光抗體試驗(yàn)（FAT）
熒光抗體試驗(yàn)（FAT）可用于檢測野外可疑豬或?qū)嶒?yàn)室接種豬的脾、淋巴結(jié)等組織壓片和冰凍切片中的ASFV抗原。
優(yōu)點(diǎn)：敏感性和特異性較佳；
缺點(diǎn)：需要專業(yè)試驗(yàn)人員，同時需要熒光顯微鏡及高質(zhì)量的熒光標(biāo)記抗體。因此僅作為ASFV的輔助檢測方法4。
2.1.4免疫組化法
該方法用來檢測急性感染ASFV豬的扁桃體組織病理學(xué)變化，通過檢測發(fā)現(xiàn)，感染ASFV豬有出血、單核細(xì)胞增多現(xiàn)象。免疫組化法對于臨床癥狀不明顯的病例，確診有一定難度，因此，該方法僅作為ASFV的輔助檢測方法。
優(yōu)點(diǎn)：特異性較佳；
缺點(diǎn)：對于臨床癥狀不明顯的病例，確診有一定難度4。
2.2.1 PCR
體外擴(kuò)增基因的一種方法，是目前ASFV常用的實(shí)驗(yàn)室檢測方法。研究表明，非洲豬瘟感染8小時， 便可從血液中檢測到其核酸物質(zhì)，因此針對非洲豬瘟病毒保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，對采集的血液或組織病料等相關(guān)物質(zhì)進(jìn)行DNA提取，進(jìn)行PCR反應(yīng)，可對其進(jìn)行快速準(zhǔn)確診斷。是目前ASFV常用的實(shí)驗(yàn)室檢測方法。眾多國內(nèi)外研究5-9均建立了ASFV的PCR檢測方法，表明該方法具有良好的敏感性和特異性，且可以檢測出極低含量的ASFV，為ASFV早期感染的快速診斷提供了有效的分子生物學(xué)檢測方法。
優(yōu)點(diǎn)：簡單快速、靈敏度高和特異性強(qiáng)。
2.2.2 熒光定量PCR
通俗講是PCR的升級版。實(shí)時熒光定量PCR比常規(guī)PCR具有更高的敏感性和特異性，可同時快速檢測大批量樣品，其更加敏感、準(zhǔn)確。舉例，McKillen等10（2010）根據(jù)9GL基因建立了MGB探針實(shí)時熒光定量PCR檢測方法，低可以檢測到20拷貝標(biāo)準(zhǔn)DNA。
優(yōu)點(diǎn)：敏感性和特異性高。
2.2.3 探針雜交技術(shù)
能有效排除PCR檢測過程中的非特異性結(jié)果， 省去了瓊脂糖凝膠電泳步驟，操作簡便、檢測迅速，在酶標(biāo)板中可批量反應(yīng)，為ASFV核酸檢測方法開辟了新的途徑，
該方法的建立難度較高、操作較繁瑣， 對實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)水平要求較高。
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