要想實驗做得好，PCR儀的操作很重要
更新時間：2019-09-05 點擊次數：2451次
要想實驗做得好，PCR儀的操作很重要
PCR儀是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。目前常用的技術，可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。利用升溫使DNA變性，在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈，進而達到基因復制的目的。可實現更好的引物退火溫度控制，該技術的一種形式便是設計帶有三個或更多分割金屬模塊，對于樣品溫度控制的能力對于PCR檢測結果的準確性和整體性能十分重要。儀器特異性的參數如升降溫速度，維持時間以及算法對于預測樣品溫度，包括模塊溫度都是準確控制樣品溫度的關鍵。它的升降溫速度意味著在一定時間內發生的PCR步驟之間的溫度變化，并通過用攝氏度每秒(°C/sec)作為單位。 相應的“升溫”和“降溫”分別代表著熱模塊的加熱和冷卻過程。
PCR儀的操作注意事項：
盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因，樣品間的交叉污染也是原因之一。因此，不僅要在進行擴增反應是謹慎認真，在樣品的收集、抽提和擴增的所有環節都應該注意：
1.戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套；
2.使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用，PCR儀吸頭不要長時間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染；
3.避免反應液飛濺，打開反應管時為避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上，應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；
4.操作多份樣品時，制備反應混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應的度；
5.后加入反應模板，加入后蓋緊反應管；
6.操作時設立陰陽性對照和空白對照，即可驗證PCR反應的可靠性，又可以協助判斷擴增系統的可信性；
7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器容易受產物氣溶膠或標本DNA的污染，使用可替換或高壓處理的加樣器。
如沒有這種特殊的加樣器，至少PCR儀操作過程中加樣器應該，不能交叉使用，尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區；
8.重復實驗，驗證結果，慎下結論。
